¿Cómo crecieron así las células L929 en el material?

L929 es una línea celular de fibroblastos de ratón comúnmente utilizada para detectar TNF-α y TNF-β. El tratamiento con TNF a menudo produce apoptosis y muerte celular, por lo que las células L929 se utilizan a menudo en inmunoensayos. Sin embargo, transfectar células L929 es muy difícil, especialmente usando reactivos de transfección basados ​​en tecnología de liposomas. Utilizamos GenJet Ver y PolyJet para transfectar células L929 y logramos una eficiencia de transfección del 75%. Los pasos experimentales simples son los siguientes.

1. Asegúrese de que la confluencia de las células L929 alcance el 80% durante la transfección. Las células deben estar sanas y no haber pasado más de 9 generaciones.

2. Para placas de 6 pocillos, se diluyeron 1,0 μg de ADN y 3,0 μl de reactivo de transfección Genjet Verⅱ o PolyJet con DMEM sin suero. Añadir reactivo de transfección diluido al ADN y dejarlo a temperatura ambiente durante 65.438 ± 05 minutos para formar un complejo de transfección. Otros recipientes de cultivo celular pueden ajustar el contenido de ADN según el área de superficie.

3. Agregue el complejo de transfección directamente a las células L929; transfecte placas de 6 pocillos en presencia de suero/antibióticos, cada placa contiene 1,0 ml de medio de cultivo.

4. Monitorizar la expresión de los genes transfectados de 24 a 48 horas después de la transfección.